世界防治结核病日这些结核分子诊断方法 [复制链接]

年3月24日是著名德国科学家罗伯特·科赫在柏林宣读发现结核菌的日子。在年纪念科赫发现结核菌周年时，世界卫生组织(WHO)和国际防痨和肺病联合会(IUATLD)共同倡议将3月24日作为“世界防治结核病日”，以提醒公众加深对结核病的认识。年3月24日是第26个世界防治结核病日，今年我国的宣传主题是：“终结结核流行，自由健康呼吸”

结核病(Tuberculosis，TB)是常见并可致命的一种传染病，由结核分枝杆菌感染引起，主要通过空气传播。结核病困扰人类已经有成千上万年的历史。科学家们在年前的以色列人遗骸和年前的埃及木乃伊上都发现了肺结核感染的痕迹。如今，这种病每年仍导致大概万人死亡，多于其他任何一种传染病，是目前全球面临的重大公共卫生问题之一。

年10月14日，世界卫生组织（WHO）正式发布了最新的全球结核病年度报告。报告估计过去一年全球新发结核病患者仍有0万，其中32%为女性，12%为15岁以下儿童，全球因结核死亡患者约万。大多数结核病病例集中在东南亚（44%）、非洲（25%）和西太平洋（18%），而东地中海（8.2%）、美洲（2.9%）和欧洲（2.5%）占比较小；三分之二的结核患者来自8个国家：印度（26%）、印度尼西亚（8.5%）、中国（8.4%）、菲律宾（6.0%）、巴基斯坦（5.7%）、尼日利亚（4.4%）、孟加拉国（3.6%）和南非（3.6%）。中国新发患者数约83.3万，居全球第三位，仅次于印度和印度尼西亚。防治肺结核的工作依旧严峻。

早期快速确诊及治疗是控制结核病传播的关键，目前肺结核的诊断主要依靠患者症状、胸部影像学检查及痰涂片抗酸染色和痰MTB培养。然而，肺结核患者症状及影像学检查往往缺乏特异性，痰涂片抗酸染色法检查敏感性和特异性都很低，很多时候会导致漏诊；痰MTB培养耗时长，以上检测手段难以满足早期快速诊断肺结核的要求。随着分子生物学的飞速发展，越来越多的分子诊断方法被应用于结核病临床诊断。年我国颁布的《“十三五”全国结核病防治规划》中明确提出分子生物学检验阳性可以辅助确诊肺结核。

分子生物学诊断

结核病分子生物学诊断方法主要分为：

①实时荧光定量PCR检测

②恒温扩增检测

③基因探针（基因芯片）检测

实时荧光定量PCR

通过监测荧光信号实时检测结核菌的特异基因及耐药相关基因单核苷酸多态性（SNP）位点，可以在2小时内检测样本中是否存在结核分枝杆菌以及是否耐药，是目前最快的结核病分子诊断技术之一，并且该方法操作简便、检测准确性高（敏感度88％，特异度99％）、污染几率小，不足之处是价格昂贵，并且目前仅能针对利福平耐药相关rpoB做出检测，能够检测的耐药相关基因及位点较少。年12月WHO批准了利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(XpertMTB/RIF)的应用，该技术被WHO誉为结核病诊断中革命性的突破。

恒温扩增

利用链置换型DNA聚合酶（BstDNApolymerase）在恒温条件下对目标基因进行快速扩增反应。该方法可用于涂阴结核病的诊断，检测灵敏度在50％～80％之间，并且恒温诊断方法对仪器的依赖程度小，试剂成本低，非常适用于基层结核病的检测，代表方法：loop-mediatedisothermalamplification(TB-LAMP;EikenChemical,Tokyo,Japan)。但是该方法容易产生假阳性结果，实验室检测时需要注意分子气溶胶的产生。

基因探针（基因芯片）检测

分为扩增和检测两步，首先对特异的片段进行PCR扩增，然后检测扩增后片段是否与结核分枝杆菌（MTB）检测探针或者耐药检测探针结合。其特点是可以区分结核病与非结核病，检测通量高，并且可以在5～8小时内检测是否为耐多药结核病（MDR-TB），代表方法：line-probeassays(LPAs;GenoTypeMTBDRplusandGenoTypeMTBDRsl,HAINLifescience,Nehren,Germany;NTM+MDRTBDetectionKit,NIPROCorporation,Osaka,Japan)，该方法特异度及灵敏度较高（80％～90％）。其缺点是需要开盖操作，容易产生污染，并且操作繁琐，价格昂贵。

未来展望

过去几十年，为预防和治疗结核病及耐药性结核病，全球进行了大量努力。结核病的基础研究、诊断方法和治疗手段都取得了巨大进步。通过此次新冠疫情我们也认识到分子诊断技术推广的必要性，随着人工智能和实验室自动化技术的快速发展，全面实现肺结核自动化分子诊断将是未来的一大趋势。

参考文献：

[1]:WorldHealthOrganization.

[2]ormanSe,etal.PerformanceofXpertMTB/RIFUltraandXpertMTB/RIFfortheDiagnosisofTuberculosisthroughTestingofFormalin-fixedParaffin-embeddedTissues.,32,(12).

[3]:刘权贤等.TB-LAMP、XpertMTB/RIF及罗氏固体培养在肺结核诊断中的比较.,31.（12）.